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Western Blot 实验之上样和电泳常见问题分析！Western Blot 实验看似简单，但是实际我们操作的时候还是状况百出，尤其是上样和电泳阶段！ 问题1：加样后样本溢出或不下沉 可能原因： 1、上样缓冲液甘油含量低； 2、配胶的时候，梳子型号选错； 3、加样过多或者过快； 4、正负极插反了。 解决方案： 1、检查 Loading buffer 中甘油含量是否正确； 2、插梳子时，需确保梳子型号跟玻璃板是完全匹配； 3、上样时应将枪头紧贴玻璃板缓慢上样，待样品全部沉入孔中，再提起枪头，上样体积可根据孔道调整； 4、确保正负极是连接正确的，蛋白是从负极往正极移动。 问题2：孔道漏样 可能原因： 1、拔梳子太用力，导致胶孔破损； 2、上样的时候，枪头过大或过度插入上样孔，使胶板变形，导致漏样。 解决方案： 1、电泳液完全浸没胶孔，拔梳子要平稳缓慢，垂直向上拔出； 2、注意枪头不要过度插入孔中。 问题3：电泳中溴酚蓝指示带由蓝变黄 可能原因： 1、可能是电泳过程中电泳时间较长，产热较大，缓冲体系的 pH 值发生变化； 2、电泳缓冲液重复使用次数太多，缓冲能力下降。 解决方案： 1、可以冰水浴电泳； 2、内槽使用新鲜的电泳液，外槽电泳液重复使用1-2次。 好了，如果大家还有不懂的或者是其他实验问题咨询的，可直接联系长沙医学实验外包公司湘元生物实验室客服老师，24小时在线免费咨询~ |
