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常见的细胞划痕实验问题答疑细胞划痕实验是观察掌握细胞迁移实验过程中细胞活动的重要实验方法,很多人初次做实验,对细胞划痕实验都不太了解,从而在实验中遇到一些问题,今天挑选了常见的问题一起来分享解决方法,慧登生物——细胞实验平台操作各类细胞的实验上百例,专业代做细胞划痕实验和各种细胞实验,通过分享希望能帮助到各位成功实验。 1、细胞划痕实验可以被其他实验替代吗?
答:不行,因为细胞划痕实验是观察细胞迁移活动的重要技术手段,而且简单快捷、经济实惠。细胞迁移参与到很多的如免疫、炎症、肿瘤转移、损伤修复、胚胎发育等生理和病理的活动中,有重要的临床研究意义。 2、细胞划痕实验都是6孔板,12或24不好用吗?
答:虽然12或者24孔板的也可以用,但更适合高通量初筛时,而6孔板大小适中,可保证有相当距离的平直划痕,便于观察。
3、如何避免细胞增殖对细胞迁移实验造成的假阳性?
答:具体的操作步骤如下,首先,需要使用无血清或低血清培养基(<2%)可使其细胞增殖减少结果的影响因素;其次,实验的通用时间是24h为细胞的一个周期,在选取合适的时间点(6,12,24h)检测划痕宽度时,控制的时间要在一个周期内;最后,不考虑其他,只考虑细胞迁移,可以先用丝裂霉素(1ug/ml)处理1h,抑制细胞的分裂。
4、如何拍好结果照片?
答:先按照6孔板背后画线的垂直方向划痕,可以形成若干交叉点,划痕一次与5条定位线相交,就会有10个可固定监测点,就不会出现前后观察位置时不固定的现象
5、得出结果的细胞不迁移?
答:首先需要避开细胞状态的影响,再考虑细胞自身的迁移能力,并非所有细胞都适合划痕实验,我们以乳腺癌为例子,乳腺癌细胞MCF-7几乎很难迁移,相对而言MDA-MB-231具有很强的迁移性。 6、那些是细胞划痕实验需要避免的细胞? 答:生长特别缓慢的细胞(如:内皮细胞)、贴壁不牢的细胞(如:神经母细胞瘤)、堆积生长或长不满的细胞(如:巨噬细胞) |