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石蜡切片完整操作流程讲解!石蜡切片整个过程包括取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与贴片、展片、烘片、脱蜡与水化、染色、脱水、透明、封片等步骤。 一般的组织从取材固定到封片制成玻片标本需要数日。 1、取材 大小和厚度需适中,通常为0.2-0.3cm厚度,1.5cm×1.5cm×0.3cm大小。取材动作要迅速,以减少组织损伤。(长沙医学实验外包公司湘元生物实验室提醒,一定要穿戴好隔离衣、手套、口罩、护目镜或面罩,防止接触甲醛飞溅和组织碎屑~) 2、固定 将取材后的组织块放入足量(体积为组织的10-20倍)的10%中性缓冲福尔马林中。时间通常需要18-24小时,视组织大小而定。 3、洗涤和脱水 将固定后的组织块依次放入浓度递增的酒精溶液中:70%酒精→80%酒精→90%酒精→95%酒精→100%酒精→100%酒精。逐步去除组织中的水分。(长沙医学实验外包公司湘元生物实验室提醒,脱水必须彻底,以避免组织收缩或变脆~) 4、透明 将脱水后的组织块放入透明剂二甲苯(或环保透明剂)中,通常两道二甲苯,每道0.5—2小时。(长沙医学实验外包公司湘元生物实验室提醒,以组织块变得透明,可看到其内部结构为判断是否透明完成~) 5、浸蜡 将透明后的组织块放入熔化的石蜡(通常熔点在56-58°C)中一般在60°C左右的恒温箱中进行。通常三道石蜡,每道1-2小时。(长沙医学实验外包公司湘元生物实验室提醒,时间不足会导致浸蜡不彻底,影响切片质量~) 6、包埋 将组织包埋在石蜡中,形成蜡块,以便后续切片。 7、切片与贴片 包埋好的蜡块用刀片修成规整的四棱台,以少许热蜡液将其底部迅速贴附于小木块上,夹在轮转式切片机的蜡块钳内,使蜡块切面与切片刀刃平行,旋紧。(长沙医学实验外包公司湘元生物实验室提醒,切片刀的锐利与否、蜡块硬度是否适当都直接影响切片质量,通常切片厚度为4~7微米,切出一片接一片的蜡带,用毛笔轻托轻放在纸上~) 8、展片 在展片机(或恒温水浴锅)中注入蒸馏水,并加热至40-45°C(长沙医学实验外包公司湘元生物实验室提醒,温度过高会使蜡带熔化,过低则无法展平)。用镊子或毛笔将切下的蜡带小心转移到水面上,再将载玻片垂直插入水中,靠近蜡带,然后向上轻轻捞起。 好了,关于石蜡切片的操作流程就说到这了,如果大家还有不懂的或者是其他实验问题咨询的,可直接联系长沙医学实验外包公司湘元生物实验室客服老师,24小时在线免费咨询~ |