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RNA质量如何检测?

提取得到的RNA,我们一般都要进行浓度、纯度和完整性检测,以确保后续实验的成功进行。


目前进行RNA质量检测会使用以下4种方法:


1、紫外分光光度计法(浓度以及纯度)


2、荧光染料法(浓度)


3、琼脂糖电泳法(完整性)


4、安捷伦2100法(浓度以及完整性)


其中大多数实验室会选择第1种-紫外分光光度计法。


核心原理:


紫外光吸收:NanoDrop利用核酸(DNA和RNA)在260 nm波长处的特异性吸收来测定其浓度。核酸中的嘌呤和嘧啶碱基含有共轭双键,这使得它们在该波长下产生最大吸收峰。 


朗伯-比尔定律:该定律表明,光的吸收程度与物质的浓度成正比。通过测量样品对特定波长光的吸收,可以计算出其浓度。 


多波长测量:NanoDrop还可以在230 nm和280 nm波长下测量,以评估样品的纯度。230 nm主要用于检测盐类和其他污染物,而280 nm则用于蛋白质的测定。那么就可以通过A260/280以及A260/230的比值来判断提取的RNA的纯度。


高质量的RNA通常表现为A260/A280比值在1.8-2.1之间(表明蛋白质污染少),A260/A230比值大于2.0(表明有机溶剂或盐离子污染低)。


好了,关于RNA质量检测的问题就说到这了,如果大家还有不懂的或者是其他实验问题咨询的,可直接联系长沙医学实验外包公司湘元生物实验室客服老师,24小时在线免费咨询~



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