细胞培养说难不难，说容易也不容易，重点还是在细心，细胞的培养与维护主要涵盖细胞复苏、传代、换液和冻存四个关键环节，下面就让长沙医学实验外包公司湘元生物实验室给大家仔细讲讲具体怎么操作和有哪些地方要格外注意吧！

1、细胞复苏：

从液氨罐中取出冻存管，迅速放入37℃水浴锅中，并确保水浴液面低于冻存管盖，轻轻摇晃使管内液体在1分钟内完全融化。

用75%乙醇彻底擦拭冻存管外壁以灭菌，然后移入超净台。将细胞悬液缓慢加入含有预热培养基的离心管中，1000rpm离心5分钟，去除冻存液中的二甲亚砜。

弃去上清液，加入新鲜培养基重悬细胞，随后转入培养瓶，置于37℃、5% CO₂培养箱中培养。

2、细胞传代

当培养瓶中细胞密度达到80%-90%汇合度时，需进行传代。首先弃去旧培养基，用PBS缓冲液轻轻冲洗细胞 2 次，长沙医学实验外包公司湘元生物实验室提醒，此举是为了去除残留血清。

加入适量胰蛋白酶，轻轻摇晃使胰酶覆盖所有细胞。随后将培养瓶置于超净工作台内(或37℃温箱旁)的台面上进行消化。在显微镜下实时观察，待细胞间隙增大、80%-90%的细胞变圆并开始脱落时(长沙医学实验外包公司湘元生物实验室提醒，通常需要3-10分钟)，立即终止消化，但注意，切勿过度消化。

用移液器轻轻吹打细胞，使其脱离瓶壁形成单细胞悬液，按1：2-1：5的比例将细胞悬液分到新的培养瓶中，补充新鲜培养基后继续培养。

3、细胞换液

当培养基颜色由红色变为黄色（pH 值下降），或细胞培养2-3天未达到传代密度时，需更换培养基。

直接弃去旧培养基，用PBS冲洗细胞1-2次，随后加入预热至 37℃的新鲜培养基，继续放入培养箱培养。

4、细胞冻存

选择对数生长期、状态良好的细胞进行冻存。按传代步骤消化细胞，离心后收集细胞沉淀，用冻存液重悬细胞，使细胞浓度达到1×10⁶-1×10⁷个 /mL。

将细胞悬液分装到冻存管中，标注细胞名称、冻存日期和操作者。采用程序性降温盒进行冻存。将冻存管放入充满异丙醇的程序性降温盒中，立即转移至-80℃冰箱过夜(长沙医学实验外包公司湘元生物实验室建议，16-24小时更好），次日，即可将冻存管迅速转入液氮罐中长期保存。

好了，关于细胞培养的问题就说这么多了，如果你还有不懂的或者是其他实验咨询的，也可以直接联系长沙医学实验外包公司湘元生物实验室客服老师，24小时在线免费咨询~