【细胞实验外包】细胞免疫荧光实验

细胞免疫荧光实验，其主要目的是用抗体检测细胞表达的蛋白，其相对于免疫组化实验的操作来说还是比较简单的，因为实验过程主要是这两部分，一个是细胞培养、一个就是细胞固定通透和染色处理。

具体的实验操作细节和注意事项，就一起和长沙细胞实验外包公司湘元生物一起来看看吧~

细胞免疫荧光实验第一步: 细胞培养

1、用多聚赖氨酸涂在爬片上放置30-120分钟。（为什么长沙细胞实验外包公司湘元生物建议做爬片呢？这是因为爬片，不仅效果更好而且更适合拍共聚焦，不想拍了也可以冷冻保存，很是方便！，而用多聚赖氨酸预处理爬片，也是因为想增加细胞粘附性。）

2、用灭菌的超纯水清洗和浸泡，等自然干燥了之后，放在紫外下照射至少1个小时以上。

3、如果用普通盖玻片而不是专用细胞爬片的话，一般长沙细胞实验外包公司湘元生物建议用0.1% Tween-20的PBS洗一下，这样更干净。

4、长沙细胞实验外包公司湘元生物建议在培养皿内滴100uL左右的培养基，然后再贴爬片，这样就贴的更牢固也不会有气泡产生！

5、常规细胞培养。

细胞免疫荧光实验第二步：细胞固定通透和染色处理

1、4%多聚甲醛孵育细胞10min。或者用放在-20℃预冷的甲醇孵育5min。

2、提前在4℃或者冰上预冷的PBS洗三次，不要太用力。

3、抗原修复。长沙细胞实验外包公司湘元生物告诉你，增加了抗原修复的步骤会让抗体更容易染上（碱性尿素缓冲液在95℃水浴10min，自然冷却即可）。

4、透化，透化10分钟然后用PBS洗干净。

5、封闭。

6、用封闭液稀释一抗，4℃过夜孵育。第二天用PBST清洗三遍后避光。孵育二抗，二抗浓度大约1抗的十倍。最后染DAPI（1ug/ml）1分钟。

7、PBS洗三遍，用抗淬灭封片剂封片拍照。

长沙细胞实验外包公司湘元生物提醒：如果实验出现非特异性染色，可能的原因有二：

是第一是固定液残留，解决办法：缩短固定时间并且在封闭液中加甘氨酸，并且抗原修复也可以帮助解决非特异性染色。

第二个原因就是二抗残留，解决办法：增加吐温洗脱掉非特异性染色。

好了，以上就是长沙细胞实验外包公司湘元生物对于细胞免疫荧光实验的详细说明了，大家还有疑问的，可直接咨询客服，24小时在线免费咨询！