细胞克隆形成实验，这2种方式，你会如何选择？

众所周知，能形成克隆的细胞一定是贴壁和有增殖活力的细胞，所以，细胞克隆形成实验是用来检测细胞增殖能力、侵袭性、对杀伤因素敏感性等项目的重要技术方法。

而细胞克隆形成实验，依据采用的培养介质的不同，我们可以把其分为平板克隆形成实验和软琼脂克隆形成实验两类。

平板克隆形成实验，主要应用于贴壁的细胞。

平板克隆形成实验操作步骤如下：（这里以平皿举例）

1、取好平板克隆形成实验需要的贴壁细胞，取对数生长期的细胞，然后我们用0.25%胰蛋白酶把该细胞消化吹打成单个的，吹打成单个的后再并把它悬浮在培养基中备用，注意， 细胞实验外包公司长沙湘元生物提醒，此培养基为（基础培养基 10%胎牛血清）。

2、细胞悬液进行梯度倍数稀释，每组5个平行样。每组接种100个细胞，放置于10ml /37℃预温培养液的皿中，细胞实验外包公司长沙湘元生物提醒：这时候记得轻轻转动培养皿，使细胞分散均匀。

3、接着，将其放在置37℃、5% CO2及饱和湿度的细胞培养箱中培养2～3周。

4、什么时候可以停止培养了呢？细胞实验外包公司长沙湘元生物提醒：只要看到培养皿中出现肉眼可见的克隆时就可以了！

5、停止培养后，丢弃上清液，用PBS浸洗2次，再加固定液固定15分钟，固定后去去固定液，再加Giemsa应用染色液染10～30分钟，染色完成后就可以用流水洗下干燥。

6、最后，将平皿倒置并叠加一张带网格的透明胶片上，计算细胞克隆形成实验的形成率。

细胞实验外包公司长沙湘元生物提醒：平板克隆形成实验，这个实验成功的关键就在于我们对细胞悬液的制备和接种密度的把控，细胞一定要分散得好，不能有细胞团，接种密度也不能过大，切记切记！

而软琼脂克隆形成实验，则多用于悬浮的肿瘤细胞和转化细胞系。

软琼脂克隆形成实验操作步骤如下：

1、软琼脂克隆形成实验开始前，我们需要配制好1.2% 和0.7%琼脂，高压灭菌后，放置在42℃的水浴锅中（这里为什么明确要求42℃，后面会有详细解释）。

2、将1.2% 琼脂与2×培养基混合，铺入6孔板作为下层胶，每孔1.5ml，37°C孵育30 min使之凝固。

3、接着，我们将制备好的单细胞悬液与0.7%琼脂充分混匀，加入6孔板作为上层胶，每孔1.5ml。待其凝固后，再在上面加入培养基，每3天更换一次。

4、最后，2~3周后显微镜下观察拍照，计算细胞克隆形成实验的形成率。

细胞实验外包公司长沙湘元生物提醒：琼脂放入水浴锅中维持在42℃，主要是防止其凝固，一旦琼脂凝固，就会影响实验效果，当然，你温度过高也不行，细胞受不住会死的啊，所以，在做细胞克隆形成实验时，要想效果好，实验操作的速度就一定要快！

好了，以上就是细胞实验外包公司长沙湘元生物对于细胞克隆形成实验操作的相关说明了，大家还有疑问的，可直接咨询客服，24小时在线免费咨询！