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细胞转染实验中,细胞转染效率很低,原因是什么?

你进行细胞转染实验的时候,是不是经常出现细胞转染效率很低的情况呢?按照长沙专业细胞实验外包公司湘元生物多年实验操作经验,细胞转染效率低下的原因是主要有这几个:


1、细胞太少或细胞密度太大


细胞转染实验中,细胞密度对转染效率有一定的影响,转染时过高或者过低的细胞密度会导致转染效率降低,而且,不同的转染试剂,要求转染时的最适细胞密度也不相同,比如,阳离子脂质体具有微量的细胞毒性而往往需要更高的铺板密度或者更多的悬浮细胞数,有的甚至要求细胞90%汇片,所以细胞转染实验前一定要把适合的密度搞清楚。


2、电压过大


做电转的时候,如果电压太大,往往会发生细胞大量死亡的情况,不同的细胞,需要的电压是不一样的,这个也要提前弄清楚。

 

3、未加血清


细胞转染实验中, 转染后未及时加入血清,也是有可能会导致细胞大量死亡,一般要在转染后的4-6小时换液且换为有血清的培养基。但是对于主流的转染试剂来说,血清的存在已经不会影响转染效率,甚至还有助于提高转染效率,如阳离子聚合物等。


4、细胞污染


细胞转染实验中,细胞污染也是造成转染效率低下的一大原因,所以平时我们保存、操作的时候就要多注意,防止细胞污染。


5、 转染载体的构建


细胞转染实验中,转染载体的构建(病毒载体,质粒DNA,RNA,PCR产物,寡核苷酸等)也影响转染结果。


6、试剂毒性大


细胞转染实验中,有时候转染效率低下,是脂质体试剂毒性大的原因。


当然,细胞转染实验中,造成细胞转染效率很低的原因肯定不止这6个,比如还有载体的形态及大小、细胞状态不好等等,这些都是有可能造成转染效率低下的,所以还是得具体情况具体分析。


好了,关于细胞转染实验中,造成细胞转染效率很低的原因就说到这了,如果大家对于实验还有其他疑问或者有需要实验协助的,可以直接咨询长沙细胞外包实验机构湘元生物客服,24小时在线免费咨询!




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