细胞实验中，如何用浓度递增诱导法构建耐药细胞株？

细胞实验中，我们常常会构建某种肿瘤细胞的耐药株进行耐药机制探究，耐药细胞株是通过适当时间药物的诱导使某种肿瘤细胞系对此药物敏感度降低，细胞株的耐药性是通过检测IC50的比值，来判断细胞耐药程度。那具体我们该如何构建耐药细胞株呢？

需要说明的是，细胞实验中，构建耐药细胞株有很多种方法，其中，体外建立耐药细胞株就有以下几种方式：大剂量药物冲击法、药物浓度递增法、药物浓度递增与大剂量药物冲击相结合法、转基因结合药物筛选法、逆转录病毒转染法等等。

而今天，就简单说下如何用浓度递增诱导法构建耐药细胞株。

首先，进行细胞实验前，你得把自己要做的细胞系和各种药物准备妥当，比如结直肠癌细胞系、膀胱癌细胞系等等；

接下来才进行耐药株构建了，具体实验步骤如下：

1.         检测初始细胞系的IC50：IC50指半抑制浓度，一般是用至少5个药物浓度梯度去处理细胞系，处理24h或者48h后进行MTT检测，绘制抑制曲线，计算抑制率为50%时的药物浓度；

2.         初始药物培养：将细胞系正常培养扩繁后，以药物的IC50值、IC30值先进行初始培养，如果培养1-2周细胞还能正常传代扩增，即选择IC50值继续培养；

3.         在培养过程中最好每2-3代细胞进行形态拍照，或者每个月进行一次拍照，部分细胞在培养过程中形态会发生改变，部分细胞在培养过程中会死亡，这是可能药物浓度过高，则需要降低药物浓度，若细胞还是出现死亡，则需要间歇式诱导，在药物诱导24h-48h后，去除药物，换新培养基对细胞进行恢复，恢复24-72h后再次进行药物培养；此过程中需要对药物刺激的浓度、时间都需要进行摸索；若细胞生长良好，则可以梯度慢慢增加药物浓度，使细胞尽快获得耐药性。

4.         耐药性检测：对诱导培养后的细胞系进行IC50的检测，耐药系数（RI）=诱导细胞IC50/初始细胞IC50。一般我们是2个月检测一次，后续每个月检测一次，若文献中此耐药株经常都是诱导12个月、10个月等，那么也可以每3个月检测一次；

总的说来，用浓度递增诱导法构建耐药细胞株这个方法细胞较易耐受，状态较好，但是诱导耐药过程耗时很长，且其化疗药物的作用方式与临床上化疗药物大剂量短疗程的化疗原则存在一定差异，大家还是需要按需选择。

好了，关于细胞实验中如何用浓度递增诱导法构建耐药细胞株就说到这了，如果大家对于实验还有其他疑问或者有需要实验协助的，可以直接咨询长沙细胞外包实验机构湘元生物客服，24小时在线免费咨询！