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还不会血管形成实验，湘元教你HUVEC细胞的背景：人脐静脉内皮细胞 (HUVEC) 是从脐带静脉内壁分离出来的原代细胞。内皮细胞常用于研究低氧、炎症、氧化应激、感染反应及正常和肿瘤相关血管生成等应用。 血管形成实验：体外血管形成实验能够很好的模拟肿瘤血管发生过程，并且适合研究某些基因或药物对这一过程的影响。血管内皮细胞（HUVEC）在基质胶（Matrigel）上保留了内皮细胞增殖分裂快、迁移速度快的特点，用成管的方法可以快速参与血管的基因和信号通路等。 1、huvec细胞：原代的huvec传代次数有限，建议在2-8代内进行实验。 2、试剂的选择：内皮细胞专用培养基、DMEM、FBS、基质胶、96孔板或24孔板。 3、基质胶的准备：首先提前24h将基质胶放入4度冰箱过夜、进行解冻备用、第二天将24孔板放在冰盒上，将基质胶用DMEM基础培养基1:1进行稀释一倍后离心，使基质胶跟培养基混匀，24孔板里加入基质胶100ul每孔，建议做重复孔；加基质胶一定垂直滴入孔底部，减少气泡产生，使用震荡的方法让胶均匀分布，最后再放入孵箱30-60分钟让其形成凝胶，凝胶是半固体，在加入细胞前是否凝固直接关系到实验的成败。 4、实验步骤：首先huvec细胞细达到80%汇合度后准备消化，一般过夜培养后的细胞状态更佳，收集细胞进行计数，并按照需求梯度稀释调整细胞的浓度，请一定保证细胞状态完好，其次，24孔板加入200ul的huvec细胞悬液，浓度约为12-20万个细胞,建议做复孔，细胞加入后不应该移动培养板，放入37度孵箱约4小时左右即可进行观察血管是否形成，一般在15小时后成管会开始缓慢皱缩凋亡，最后结果分析、图片采集。根据需求可用固定后进行荧光染色。 |
