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Transwell细胞迁移实验难做吗？现在，市面上检测细胞迁移能力的实验主要是两种，一个是Transwell实验，一个是划痕实验！ 但是由于Transwell实验能够很好的排除增殖带来的影响，所以，在有足够经费支持的实验室，都会优先选择Transwell来做细胞迁移实验，那问题来了，Transwell细胞迁移实验难做吗？具体实验步骤又是怎样的呢？ Transwell细胞迁移实验步骤：
第一步、基质胶铺板 Matrigel 1:8(根据细胞产生mmp的量来决定)稀释,包被Transwell小室底部膜的上室面,置37℃30min使Matrigel聚合成凝胶，使用前进行基底膜水化。
第二步、制备细胞悬液
2.1、制备细胞悬液前，建议可先让细胞撤血清饥饿12-24h,这样做的好处是可以进一步去除血清的影响；
2.2、消化细胞,终止消化后离心弃去培养液,用无钙的PBS洗1遍离心去除PBS,用含BSA的无血清培养基重悬，调整细胞密度至5×105/ml。
第三步、接种细胞
3.1、取细胞悬液100μl加入Transwell小室；
3.2 、24孔板下室一般加入600μl含血清的培养基；（这个地方要提醒的是：我们操作过程中，难免下层培养液和小室间会有气泡产生，但不用担心，这也不是就宣告实验失败了，这时候我们只要发现出现了气泡，及时将小室提起,去除气泡,再将小室放进培养板就能弥补过来）
3.3、培养细胞:常规培养12-48h(主要依癌细胞侵袭能力而定)。
3.4 固定，染色，取出Transwell小室,弃去孔中培养液,用无钙的PBS洗2遍,4%多聚甲醛固定30分钟,将小室适当风干，0.1%结晶紫染色20 min,用棉签轻轻擦掉上层未迁移细胞,用PBS洗3遍。
第四步、结果统计
直接计数法,“贴壁”细胞计数,通过给细胞染色,可在镜下计数细胞。400倍显微镜下随即五个视野观察细胞,记数。
这样，Transwell细胞迁移实验就做完了，就这么简单！ |
