细胞活性检测方法有哪些？

负责细胞检测的小伙伴，经常需要对细胞的活性进行验证，那么怎么知道自己研究的细胞是否还活着呢？ 

PCR、抗体IHC染色等细胞活性检测，其实只能反映某个时间点的细胞行为，因此常常具有局限性。在传统细胞分析方法没有达到预期结果时，使用实时细胞分析方法就发挥着重要作用。今天小编就给大家介绍一下我们常用的分析细胞活性的方法。

在实验室里我们经常操作的细胞活性检测的常用方法，大概就是这几个：细胞代谢检测；化学发光法细胞活性检；DNA合成增殖；荧光染料细胞活性检测和细胞计数检测（台盼蓝）。

化学发光法细胞活性检测：

先来介绍一下腺苷三磷酸（ATP adenosine triphosphate），它是由腺嘌呤、核糖和3个磷酸基团连接而成，当水解时释放出较多能量，是生物体内最直接的能量来源。ATP发光法，是通过检测细胞内ATP含量来分析细胞活性及增殖的。常见的ATP发光法是利用外源萤火虫荧光素/荧光素酶与细胞内的ATP发生氧化反应而产生光子，通过监测光度来检测ATP含量，从而分析细胞活性与增殖。

原理图：

荧光染料细胞活性检测：

例如荧光素二乙酸酯（FDA）及其衍生物（如CFSE）是非荧光分子，当他们扩散到细胞中时，可以被细胞内非特异性酯酶水解，从而产生荧光。荧光产物只在具有完整细胞膜和活性酯酶活性的细胞中产生，而且会跟随细胞分裂，平均分配到子细胞中。

细胞代谢检测：

CCK-8检测是一种基于 SST-8 的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测。SST-8 被细胞内脱氢酶生物还原后生成的甲臜能够直接溶解在培养基中。随着细胞增殖越来越快，越来越多，染的颜色也越来越深；细胞毒性逐渐增加，颜色会越来越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目通常呈线性关系。

细胞计数检测：

台盼蓝染料是一种重要的染色剂，可以将死组织或死细胞染成蓝色（具有完整细胞膜的活细胞或组织却不着色）。 由于细胞在通过膜的化合物中具有很高的选择性，所以只在只有死细胞在显微镜下显示为蓝色。

DNA合成增殖：

胸腺嘧啶的衍生物--BrdU，常常在活细胞中标记新合成的DNA,可代替胸腺嘧啶选择性整合到复制细胞中新合成的DNA中（细胞周期S期）这种掺入可以稳定存在，而细胞的增殖能力可以用BrdU的特异性抗原检测DNA复制子细胞里的BrdU的掺入，来判断。