显色拍照是Western Blot实验的最后一步，临门一脚不得马虎！

目前主流的WB显色方法是用ECL显色法，长沙医学实验外包公司湘元生物也比较推荐这个方法，因为此方法灵敏度高、重复性好。ECL化学发光液的主要成分是鲁米诺及异鲁米诺衍生物，其原理很简单，就是鲁米诺和过氧化氢混合后作为底物，可在HRP的作用下发荧光，利用X光片或化学发光成像系统采集图像。

操作步骤：

1、将杂交膜置于化学发光成像仪载物台上；

2、在避光环境中，取等体积（如各取500μL）ECL试剂A液和B液，充分混合；

3、用移液器吸取适量（长沙医学实验外包公司湘元生物一般会建议大家根据膜的大小来取量，一般1平方厘米约100μL）混合液，均匀滴在杂交膜上，充分湿润；

4、推入载物台后关好门，设置曝光时间拍摄照片。

 注意事项：

1、ECL显影液应该涂抹均匀，使杂交膜充分湿润，避免操作失误引起的发光误差；

2、若条带很亮且背景高，长沙医学实验外包公司湘元生物建议可以减少曝光时间；若条带很浅，则可适当增加曝光时间；

3、采用暗室胶片曝光方法，操作需要尽量熟练，除了要把握曝光时间，还要避免位移（长沙医学实验外包公司湘元生物提醒，压片、取片过程中胶片和杂交膜不能有移动）；保留好胶片，作为原始凭证；

4、使用化学发光成像仪采集图像，注意采集白光下的图像，并与发光的图像进行融合，作为原始凭证保存。

好了，关于Western Blot实验显色拍照阶段的问题就说这么多了，如果你还有不懂的或者是其他实验咨询的，也可以直接联系长沙医学实验外包公司湘元生物实验室客服老师，24小时在线免费咨询~