为什么我们要减少细胞碎片的产生?大家都知道,流式细胞仪是不能将细胞碎片过滤出来的,它的话只能分析细胞。
如果细胞碎片太多,就会导致流式细胞仪的前向散射光(FSC)和侧向散射光(SSC)参数的读数异常,这可能会干扰对细胞大小和颗粒度的准确评估。所以制备样本时,靠谱的细胞实验外包服务公司-长沙湘元生物实验室,建议你可以采取以下措施来减少细胞碎片的产生~
1、适当的消化酶,避免过度消化导致细胞破损
对于贴壁牢固的细胞,如成纤维细胞,通常使用胰蛋白酶,浓度一般为0.25% - 0.5%。
而对于贴壁相对较弱的细胞,如某些上皮细胞,可能需要使用较温和的消化酶或较低浓度的胰蛋白酶,或者选择胶原酶等。
原代细胞通常比细胞系更脆弱,对消化酶的敏感性也不同。可以选择分散酶等更加温和的消化条件,以保持原代细胞的活性和功能。
2、操作留心,尽量轻柔的温和处理细胞
在制备单细胞悬液时,应尽量减少涡旋振荡、离心速度及次数,这些操作都会影响细胞活力,靠谱的细胞实验外包服务公司-长沙湘元生物实验室建议可以使用预冷的缓冲液和低温环境处理细胞,这样有助于维持细胞的完整性。
3、适当孔径的细胞过滤器过滤
我们也可通过适当孔径的细胞过滤器过滤样本,有条件的,靠谱的细胞实验外包服务公司-长沙湘元生物实验室建议还可使用层流洗涤技术,进一步减少细胞碎片和杂质。
4、添加抗凝剂和DNA酶
EDTA可以减少阳离子依赖性细胞粘附,而DNA酶能降解死细胞的DNA,减少细胞粘附和团块形成。
5、使用MARS系统等自动化设备
自动化的样品处理设备,如MARS系统,可以在减少人为错误的同时,提供更高的细胞回收率和更低的碎片产生率。
好了,细胞碎片的问题解决了,大家可以按照自己的进度继续开展实验了,当然,如果大家还有不明白的或者是需要实验协助指导的,可以直接咨询靠谱的细胞实验外包服务公司长沙湘元生物实验室哦!