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细胞增殖检测太难了!长沙有好的细胞实验外包服务公司推荐吗?

细胞增殖检测方法有很多,常见的就有细胞计数法、荧光染料标记法及比色法等,下面长沙细胞实验外包服务公司湘元生物实验室来重点说说比色法!


检测原理:活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为不溶于水的蓝紫色结晶甲臜(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲臜,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。


实验步骤(以贴壁细胞为例):


1、细胞铺板:多用96孔板。收集对数期细胞,铺板密度为1000-10000/孔,每孔加液量100μl(长沙细胞实验外包服务公司湘元生物实验室推荐,边缘孔用无菌PBS填充)。


2、加药干预:在5%CO2,37℃细胞培养箱中培养至细胞融合度约80-90%,加入药物干预,每组设5个复孔,在5%CO 2 ,37℃细胞培养箱中继续培养12-48小时。


3、加MTT:吸去培养上清,每孔加入90μl培养基+10μl MTT溶液(长沙细胞实验外包服务公司湘元生物实验室推荐,MTT占比10%),继续培养4h。


4、加DMSO:终止培养,小心吸去孔内培养液,每孔加入100-150μl DMSO,置摇床上低速振荡10min,使结晶物充分溶解。


5、酶标仪检测:在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。注意同时检测调零孔(培养基、MTT、二甲基亚砜),对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜)。


长沙细胞实验外包服务公司湘元生物实验室提醒,这些问题要注意:


1、铺板密度要注意,不同细胞的铺板密度可适当调整,如细胞较小,或生长较慢,可适当提高铺板密度。


2、加MTT前一定要观察MTT的颜色,长沙细胞实验外包服务公司湘元生物实验室提醒,如果发现变色尤其是变成灰绿色时,表明MTT已经发生变性,不能使用了。


虽然比色法检测细胞增殖情况看似简单,但实际非常考验实验员的操作,所以,情况允许的话,建议大家可以交给专业的机构协助。那么长沙有好的细胞实验外包服务公司推荐吗?推荐长沙细胞实验外包服务公司湘元生物实验室,拥有1000多平专业实验室,完善的实验设备,也有一批经验丰富、技术娴熟的技术团队,能够提供高质量的细胞实验外包服务。



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